凝膠成像(xiàng)係統即(jí)對DNA/RNA/蛋白質等凝(níng)膠電泳(yǒng)不同染色(sè)及微孔板(bǎn),平(píng)皿(mǐn)等(děng)非化學發(fā)光(guāng)成(chéng)像(xiàng)檢測分析。凝(níng)膠(jiāo)成(chéng)像係統(tǒng)可(kě)以(yǐ)應用於分子量(liáng)計算(suàn),密度(dù)掃描,密度定(dìng)量,PCR定量(liáng)等(děng)生物工(gōng)程(chéng)常(cháng)規研(yán)究(jiū)。
凝膠成像係(xì)統的原理:
樣品在電泳(yǒng)凝膠(jiāo)或者其(qí)他(tā)載體(tǐ)上(shàng)的遷移率(shuài)不(bù)一(yī)樣,以(yǐ)標(biāo)準品或者其他(tā)的(dí)替(tì)代(dài)標準(zhǔn)品(pǐn)相(xiāng)比較就(jiù)會對(duì)未(wèi)知樣品作一(yī)個(gè)定(dìng)性(xìng)分析。這個就(jiù)是圖(tú)像分(fēn)析係統定性的(dí)基礎。根據(jù)未知樣(yàng)品在圖譜中的位(wèi)置可以對其作(zuò)定性分析(xī),就可以(yǐ)確(què)定它的(dí)成(chéng)份(fèn)和性質(zhì)。
樣(yàng)品(pǐn)對投射或者(zhě)反射(shè)光(guāng)有部分(fēn)的(dí)吸收(shōu),從而(ér)照相所得到(dào)的圖(tú)像上(shàng)麵(miàn)的樣品條(tiáo)帶的光密度(dù)就會(huì)有差異。光密度於(yú)樣品(pǐn)的濃(nóng)度或(huò)者質量(liáng)成(chéng)綫性(xìng)關係(xì)。根(gēn)據未(wèi)知(zhī)樣品(pǐn)的光密(mì)度(dù),通過(guò)於(yú)已知(zhī)濃度的(dí)樣品條(tiáo)帶(dài)的光(guāng)密度指(zhǐ)相比(bǐ)較就(jiù)可以得(dé)到(dào)未知樣品(pǐn)的(dí)濃度或者質(zhì)量。這就(jiù)是圖(tú)像(xiàng)分(fēn)析係統定(dìng)量(liáng)的基礎(chǔ)。采(cǎi)用技術(shù)的(dí)紫(zǐ)外透射(shè)光(guāng)源(yuán)和(hé)白(bái)光透(tòu)射光(guāng)源使光的分布更(gēng)加均(jūn)匀,最(zuì)大(dà)限度的消除(chú)了光密(mì)度不均造(zào)成(chéng)的(dí)對結果的(dí)影響。
應用範圍:
總(zǒng)體上來說(shuō)凝(níng)膠(jiāo)成像係統可(kě)應(yīng)用於蛋白質,核酸(suān),多肽(tài),氨基酸(suān),多聚(jù)氨(ān)基酸等其他(tā)生物(wù)分(fēn)子的分離純(chún)化(huà)結(jié)果作定(dìng)性(xìng)分(fēn)析。
1,分子(zǐ)量(liáng)定(dìng)量(liáng):對(duì)於一(yī)般(bān)常(cháng)用的(dí)DNA膠(jiāo)片(piàn),利(lì)用分子(zǐ)量(liáng)定量功能(néng),通(tōng)過對(duì)膠上DNA Marker條(tiáo)帶的已(yǐ)知(zhī)分(fēn)子量注釋,自(zì)動(dòng)生成(chéng)擬合(hé)曲綫(xiàn),並(bìng)以它衡(héng)量(liáng)得到未知(zhī)條帶的分子量(liáng)。通過這種(zhǒng)方(fāng)法(fǎ)所得到的結果(guǒ)較肉眼觀察估計要準確(què)很多(duō)。
2,密(mì)度(dù)定量(liáng):一般(bān)常用的測(cè)定DNA和(hé)RNA濃(nóng)度的方(fāng)法(fǎ)是紫外吸收法,但(dàn)它(tā)隻能測(cè)定樣(yàng)品(pǐn)中的總核苷酸濃度,而不(bù)能區(qū)分(fēn)各(gè)個長度(dù)片(piàn)段的濃度。利用凝膠(jiāo)成像(xiàng)係統和軟(ruǎn)件(jiàn),先將DNA膠片(piàn)上某一已(yǐ)知其DNA含量的(dí)標(biāo)準(zhǔn)條(tiáo)帶(dài)進(jìn)行密度標定(dìng)以後,可以方便的單(dān)擊(jī)其他(tā)未知條帶(dài),根據與已(yǐ)知(zhī)條(tiáo)帶(dài)的(dí)密(mì)度(dù)做(zuò)比(bǐ)較(jiào),可(kě)以得到未(wèi)知(zhī)DNA的(dí)含(hán)量。此方(fāng)法也適(shì)用於(yú)對(duì)PA GE蛋白膠條(tiáo)帶(dài)的濃度(dù)測(cè)定。
3,密度掃(sǎo)描(miáo):在(zài)分子(zǐ)生物學和(hé)生(shēng)物(wù)工(gōng)程(chéng)研(yán)究中(zhōng),常用到的(dí)是對蛋白表達產(chǎn)物(wù)占整個菌體蛋白的百(bǎi)分含(hán)量的計算。傳統的方(fāng)法是(shì)利(lì)用(yòng)的(dí)密度(dù)掃描,但(dàn)利用生物(wù)分析軟件(jiàn)結(jié)合現在實驗(yàn)室常規配備的掃(sǎo)描(miáo)儀或者(zhě)直接(jiē)用白光照射的(dí)凝膠成(chéng)像(xiàng)就能完成(chéng)此(cǐ)項(xiàng)工(gōng)作。
4,PCR定量(liáng):PCR定(dìng)量(liáng)主(zhǔ)要(yào)是(shì)指(zhǐ),如果PCR實(shí)驗擴增出來的條帶不是(shì)一(yī)條,那(nà)麼(mó)可以利用(yòng)軟件計算出各個條(tiáo)帶(dài)占總體(tǐ)條帶(dài)的相(xiāng)對百(bǎi)分(fēn)數。就此功(gōng)能(néng)而(ér)言,與密(mì)度掃(sǎo)描類似,但(dàn)實(shí)際在原理(lǐ)上(shàng)並不(bù)相(xiāng)同。PCR定量(liáng)是(shì)對選(xuǎn)定的(dí)幾(jī)條帶(dài)進行(háng)相對(duì)密(mì)度定(dìng)量並(bìng)計算(suàn)其(qí)占(zhān)總和的百分數(shù),密度(dù)掃描(miáo)時並對選擇區(qū)域生成縱(zòng)向(xiàng)掃(sǎo)描(miáo)曲(qū)綫圖並積(jī)分。